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白头翁对二甲基肼诱发小鼠大肠癌的防治作用和机理研究
1 材料与方法
1.1 试验药物 白头翁(BTW)饮片购自杭州市新特药公司中药饮片分公司，产地为安徽滁县，经本校植化室鉴定。常法制备白头翁水煎剂和醇提液。
1.2 动物 ICR ♀小鼠体重18～22g，由浙江省实验动物中心提供。
1.3 试剂 1，2-二甲肼(DMH)、还原型谷胱甘肽(GSH)、二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)等均为美国Sigma公司产品；三羟甲基氨基甲烷(Tris):Gibco BRL产品；邻苯三酚：江苏无锡市科技实验二厂产品；PCNA-PC10(IgG2a)单克隆抗体：丹麦DAKO公司产品；S-P试剂盒：福州迈新生物技术开发公司产品。
1.4 方法 120只♀小鼠随机分成6组，除对照组外，各组小鼠按20mg/kg剂量每周背侧颈部皮下注射一次DMH，共25周以诱发小鼠大肠癌 。治疗组于诱癌第18周时开始灌胃给药，其余均为全程给药，每天1次，每周连续6天，至25周末结束。动物每周称重1次以调整给药剂量。分别于实验第10、12、14、16周末每组各处死解剖1只小鼠，并于25周末处死全部剩余小鼠，取肛门以上8cm肠段沿结肠纵轴剖开，洗净，称肠重，并仔细观察记录有无肿瘤发生及发生数目、大小和位置，计算肿瘤发生率。将大肠标本置于10%福尔马林溶液中固定，以“席卷法”石蜡包埋，切片，HE染色，行常规病理学检查。红细胞SOD活力测定采用邻苯三酚自氧化法 进行。全血GSH-Px活力测定采用DTNB直接法 。大肠粘膜增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)检测采用免疫组化方法(S-P法)检测，步骤按试剂说明书进行，以PCNA标记指数(PCNA-LI)作为评价指标，PCNA-LI=(阳性细胞数/1000)×100%。
2 结果
2.1 一般情况 实验期间共死亡小鼠14只，其中DMH染毒组小鼠12只，绝大多数发生在诱癌8周内(9/12)，死前动物消瘦、衰竭，解剖未发现特殊病变和肿瘤，可能系注射DMH的毒性引起。
2.2 白头翁对诱癌小鼠大肠肠重、肿瘤发生数及发生率的影响 除空白对照组粘膜完整光滑，未发现大肠肿瘤外，各DMH染毒组小鼠肠粘膜均有不同程度的增厚，皱襞紊乱。诱发肿瘤均为隆起型，主要分布在距肛门以上8cm肠段内，尤以5cm处较集中，肿瘤发生数在0～19个范围内不等。肿瘤大小不一，多数直径约1～2mm，DMH模型组肿瘤直径相对较大。各DMH染毒组之间肠重无明显差异，白头翁醇提物组肿瘤发生数和发生率均明显少于DMH模型组，白头翁水煎剂15g/kg组肿瘤发生数亦较模型组显著减少，见表1。
