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细胞粘附分子在大肠癌中的表达及其临床意义
癌细胞与细胞外基质(ECM)之间的相互作用是肿瘤浸润和转移的一个重要环节，这种相互作用是由存在于细胞膜上的一大类细胞粘附分子(CAMs)来介导的 。CAMs不仅参与调节正常细胞的生物学行为，而且对肿瘤细胞的浸润和转移有着重要的影响。根据免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子结构上的特点，CAMs可分为五大类，即整合素、钙粘蛋白、免疫球蛋白超基因家族、选择蛋白和CD44分子等［2，3］。本文选择免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子的标准型(CD44s)及其变异型CD44v6两种单抗，应用免疫组合的方法对20例正常大肠粘膜和82例大肠癌原发灶组织进行研究，探讨CAMs的表达与大肠癌浸润转移影响及各因素的内在联系。
1 材料与方法
1.1 材料：选自我院及协作单位1985年1月至1999年2月间大肠癌原发灶组织块共82例，均经病理诊断证实，其中高分化腺癌48例，低分化腺癌34例，20例正常大肠粘膜组织取自大肠癌患者距癌肿边缘10cm以上的正常大肠粘膜组织，各例均有完整的临床病理资料。CD44s、CD44v6单抗及免疫组化S－P试剂盒均购自北京中山生物技术公司。
1.2 方法：组织切片脱蜡水洗，3%H2O2甲醇(试剂A)处理10min，蒸馏水洗3×2min，将切片放入柠檬酸盐缓冲液的容器中，置微波炉进行抗原修复10 min，冷却后蒸馏水洗，PBS洗2次，每张切片滴非免疫性动物血清(试剂B)，室温孵育10 min，分别加CD44s(稀释度1∶100)、CD44v6(稀释度1∶50)抗体于4 ℃过夜。PSB洗3×10 min，滴加生物素标记的第二抗体(试剂C)，室温10 min，PBS洗3×10 min，滴加链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶溶液(试剂D)，室温10 min，PBS洗3×5 min，AEC显色，苏木素复染，水溶性封片剂封片。设阳性对照及同时用PBD替代一抗作阴性对照。
1.3 判断标准及统计学方法：根据细胞膜、细胞质的着色程度和范围作如下描述：(－)基本不着色或未见阳性细胞；(＋)着色淡或着色细胞高于5%，但低于25%；()着色适中或着色细胞占25%～50%；()着色或着色细胞大于50%。所获半定量数据进行χ2检验和spearman等级相关分析。
2 结 果
2.1 正常大肠粘膜组织，大肠腺癌组织CD44s和CD44v6的表达特征：CD44s在正常大肠粘膜上皮中有10%(2/20)微弱阳性表达，而间质纤维母细胞、平滑肌细胞呈强阳性表达，CD44v6在正常大肠粘膜组织及间质中均无表达。大肠癌中CD44s和CD44v6阳性率分别为91.4%(75/82)和65.8%(54/82)，与正常大肠粘膜组织相比明显增加(P＜0.01)。而且阳性物质在细胞膜上呈非均质性着色，明显丧失极性，CD44v6在低分化腺癌中细胞膜、细胞质表达呈强阳性。
2.2 CD44s和CD44v6表达与大肠癌临床病理特征的关系(见表1)：大肠腺癌CD44s的表达，与肿瘤大小、生长情况等无显著相关性(P均＞0.05)，两者的表达运用spearman等级相关分析表明显著相关(r=0.803,P＜0.01)。CD44v6阳性率，浸润型显著高于膨胀型，分化差者显著高于分化好者，浸润浆膜层显著高于未穿透浆膜层，伴有淋巴结转移显著高于无淋巴结转移者(P＜0.01)。
